شناسایی،جداسازی و تعیین خصوصیت ژن های بیان شونده گندم نسبت به آلودگی بیماری سپتوریا

با توجه به جمعیت روز افزون جهان، تقاضا برای مواد غذایی خصوصا گندم رو به افزایش است. گندم یکی از مهم ترین محصولات زراعی است که حدود 16% از زمین های زراعی را به خود اختصاص داده است. بیماری های گیاهی یکی از محدودیت های بزرگ در تولید محصولات است. سپتوریوز برگی گندم از مهم ترین بیماری های گندم است که سالانه حدود 2 درصد از محصول گندم را از بین می برد. یکی از روش های مطالعه مکانیزم مقاومت به این بیماری، شناسایی و تعیین خصوصیت ژن های بیان شونده در شرایط بیماری سپتوریا در گندم و انتقال ژن های مقاوم به ارقام حساس می باشد. در این مطالعه جهت نیل به این هدف، از روش cdna-aflp استفاده گردید. بدین منظور بذور ارقام تجن و ژنوتیپ مقاوم در گلخانه کشت گردید و با اسپورهای قارچ سپتوریا در مرحله دو برگی آلوده شدند. از برگ های دوم در زمان های 0، 6، 24، 72، 120و 168 ساعت بعد از آلودگی نمونه برداری انجام گرفت. mrna از rna کل و با استفاده از پرایمر oligo-dt تخلیص گردید. رشته اول و دوم cdna سنتز شد و cdna با استفاده از psti و tagi که به ترتیب به عنوان آنزیم های برشی 6 و 4 نوکلئوتیدی هستند، برش و به قطعاتی تقسیم شد. رابط ها متصل شده به قطعات برشی با استفاده از آغازگرهای انتخابی در مرحله بعد از pre-amplification تکثیر شدند. ژن های بیان شونده افتراقی روی ژل پلی اکریلامید تعیین و در باکتری e.coliبا استفاده از کیت کلون جت همسانه سازی و سپس توالی یابی گردید. داده ها با استفاده از تکنیک blast x آنالیز شد. نتایج نشان داد که ژن های جدا شده در چندین گروه شامل ژن های خانه دار، ژن های انتقال سیگنال، عوامل رونویسی، ژن های حمل و نقل و ژن های مربوط به واکنش های فتوسنتز و تنفس قرار دارند. همچنین برای چهار قطعه مشتق شده از رونوشت هیچگونه شباهتی در بانک ژن یافت نشد